Inhoudsopgave
Waar knippen restrictie-enzymen?
Begin jaren zeventig zijn enzymen ontdekt die dubbelstrengs DNA op specifieke plaatsen knippen. Deze zogenoemde restrictie-endonucleasen herkennen een sequentie in het DNA en knippen de binding tussen twee basen in beide strengen.
Wat doen restrictie-enzymen?
Een restrictie-enzym of restrictie-endonuclease is een knipenzym dat in staat is om op bepaalde plaatsen DNA in stukken te knippen. Er zijn verschillende typen. Daarnaast zijn er restrictie-exonuclease die het DNA van de uiteinden afknipt en daardoor niet van belang zijn voor genetische modificatie technieken.
Hoe werkt ligase?
DNA-ligase is een speciaal type ligase (EC-nummer 6.5.1. X) dat DNA-strengen, waarvan beide complementaire strengen gebroken zijn, weer aan elkaar kan maken. De benodigde energie wordt verkregen van ATP. DNA-ligase is zowel betrokken bij DNA-herstelmechanismen als bij DNA-replicatie.
Welk enzym wordt gebruikt om DNA stukken weer aan elkaar te zetten?
Om replicatie te beginnen, wordt een kort RNA-fragment, een zogenaamde primer, gekoppeld aan de template DNA-streng. Deze primer wordt gevormd door het enzym primase (een speciale RNA-polymerase).
Wat gebeurt er wanneer je bij Gelelektroforese de slotjes aan de positieve kant van de gel zet en aan de negatieve kant?
Als de positieve pool (de anode) zich onderin de gel bevindt, bewegen negatief geladen moleculen zich naar beneden. Hoe groter de moleculen, des te trager ze zullen bewegen (migreren); hoe kleiner de moleculen, hoe sneller ze zullen bewegen. De te scheiden moleculen kunnen bijvoorbeeld eiwitten of DNA-fragmenten zijn.
Waarom wordt een DNA Restriction buffer mix gemengd vóórdat het restrictie-enzym wordt toegevoegd?
Restrictie-enzymen werken op vaste sequenties, dus zijn de ‘sticky’ uiteinden voor één restrictie-enzym altijd gelijk. Hierdoor is het mogelijk vreemd DNA aan elkaar te ‘plakken’, dus ook om vreemde genen in het DNA van een bepaald organisme te brengen. Deze organismen worden dan transgeen.